Фрагментация ДНК сперматозоидов: от теории к практике

В по­след­ние го­ды мно­го ис­сле­до­ва­ний под­твер­ди­ли, что ре­зуль­та­ты ана­ли­за на це­лост­ность ДНК спер­ма­то­зо­и­дов кор­ре­ли­ру­ют прак­ти­че­ски с каж­дой сур­ро­гат­ной ко­неч­ной точ­кой фер­тиль­но­сти. Это ка­са­ет­ся фер­ти­ли­за­ции, ран­не­го раз­ви­тия эм­бри­о­на, им­план­та­ции и невы­на­ши­ва­ния. В ис­сле­до­ва­ни­ях на жи­вот­ных бы­ла под­твер­жде­на связь меж­ду фраг­мен­та­ци­ей ДНК и де­фек­та­ми раз­ви­тия у потом­ства. Бы­ла пред­по­ло­же­на и в даль­ней­шем под­твер­жде­на ас­со­ци­а­ция меж­ду по­вре­жде­ни­ем ДНК спер­ма­то­зо­и­дов и он­ко­ло­ги­че­ски­ми за­боле­ва­ни­я­ми в дет­ском воз­расте.Це­лью опре­де­ле­ния ин­дек­са фраг­мен­та­ции ДНК спер­ма­то­зо­и­дов мо­жет быть вы­бор ме­то­дов вспо­мо­га­тель­ных ре­про­дук­тив­ных тех­но­ло­гий, наи­бо­лее под­хо­дя­щих для этой па­ры. Чем вы­ше це­лост­ность ДНК, тем вы­ше ве­ро­ят­ность то­го, что бу­дут успеш­ны внут­ри­ма­точ­ная ин­се­ми­на­ция и экс­тра­кор­по­раль­ное опло­до­тво­ре­ние. При вы­со­кой фраг­мен­та­ции ДНК бо­лее при­ем­ле­мым ме­то­дом бу­дет ин­тра­ци­то­плаз­ма­ти­че­ская инъ­ек­ция спер­ма­то­зо­и­да. Есте­ствен­но, па­ци­ен­ты с оли­го­асте­но­те­ра­то­зоос­пер­ми­ей (ОАТ-син­дром) не по­лу­чат поль­зы от это­го ана­ли­за, так как за­ве­до­мо наи­бо­лее под­хо­дя­щим ме­то­дом для них бу­дет ICSI.Кон­тин­гент па­ци­ен­тов, ко­то­рым ана­лиз на фраг­мен­та­цию ДНК спер­ма­то­зо­и­дов мо­жет предо­ста­вить цен­ную в плане даль­ней­шей так­ти­ки ве­де­ния ин­фор­ма­цию, вклю­ча­ет па­ры с необъ­яс­ни­мым бес­пло­ди­ем, бес­плод­ные па­ры с муж­чи­на­ми с нор­маль­ной спер­мо­грам­мой, па­ры с без­успеш­ны­ми по­пыт­ка­ми ЭКО в ана­мне­зе и па­ры с при­выч­ным невы­на­ши­ва­ни­ем бе­ре­мен­но­сти.

Наи­бо­лее ча­сто при­ме­ня­е­мы­ми те­ста­ми для опре­де­ле­ния фраг­мен­та­ции ДНК яв­ля­ют­ся Comet, TUNEL и ана­лиз дис­пер­сии хро­ма­ти­на (Halo). Они от­ли­ча­ют­ся как по сво­е­му био­хи­ми­че­ско­му прин­ци­пу и ме­то­ди­ке вы­пол­не­ния, так и по ре­фе­ренс­ным зна­че­ни­ям, что нуж­но учи­ты­вать при ин­тер­пре­та­ции ре­зуль­та­тов.

• Ме­тод Comet ос­но­ван на прин­ци­пе элек­тро­фо­ре­за, в ре­зуль­та­те ко­то­ро­го фраг­мен­ты ДНК дви­жут­ся от её ос­нов­ной мас­сы в ви­де «хво­ста ко­ме­ты». Этот спо­соб яв­ля­ет­ся до­ста­точ­но точ­ным, мо­жет вы­пол­нять­ся с неболь­шим ко­ли­че­ством спер­ма­то­зо­и­дов (5000 и бо­лее) и поз­во­ля­ет раз­ли­чать од­но­це­по­чеч­ные и дву­це­по­чеч­ные раз­ры­вы.
• Ме­тод TUNEL ос­но­ван на флу­о­рес­цент­ной мар­ки­ров­ке сво­бод­ных кон­цов нук­лео­тид­ных по­сле­до­ва­тель­но­стей, бла­го­да­ря ко­то­рой уда­ёт­ся фик­си­ро­вать ко­ли­че­ство од­но­це­по­чеч­ных и дву­це­по­чеч­ных раз­ры­вов ДНК. Недо­стат­ком ме­то­да яв­ля­ет­ся боль­шое раз­но­об­ра­зие про­то­ко­лов, а так­же по­те­ря точ­но­сти при на­ли­чии в эяку­ля­те уме­рен­но­го и боль­шо­го ко­ли­че­ства мёрт­вых спер­ма­то­зо­и­дов. Этот ме­тод мож­но счи­тать пер­спек­тив­ным, но по­ка ма­ло­изу­чен­ным.
• Ме­тод Halo, в от­ли­чие от дру­гих, вы­яв­ля­ет не по­вре­ждён­ную ДНК, а цель­ную ДНК, во­круг ко­то­рой об­ра­зу­ет­ся «оре­ол» из дву­це­по­чеч­ных пе­тель по­сле уда­ле­ния про­та­ми­нов. Это наи­бо­лее быст­рый и де­шё­вый спо­соб опре­де­ле­ния ин­дек­са фраг­мен­та­ции ДНК.

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ПО ТЕМЕ

---

ТАКЖЕ ПО ТЕМЕ

---