Изоляция и дифференциация стволовых клеток Лейдига из тестикулярных биоптатов человека: потенциальная модальность для повышения тестостерона сыворотки крови

Ан­но­тация

Экс­пе­ри­мен­таль­ное ис­сле­до­ва­ние по­ка­за­ло, что из биоп­та­та яич­ка воз­мож­но вы­де­ле­ние и даль­ней­шее куль­ти­ви­ро­ва­ние кле­ток Лейдига.

LEYDIG STEM CELL ISOLATION AND DIFFERENTIATION FROM HUMAN TESTIS BIOPSIES: POTENTIAL MODALITY TO INCREASE SERUM TESTOSTERONE

Вве­де­ние и цели

На­ру­ше­ние вы­ра­бот­ки те­сто­сте­ро­на в ре­зуль­та­те по­те­ри или дис­функ­ции кле­ток Лей­ди­га мо­жет на­блю­дать­ся у муж­чин с те­сти­ку­ляр­ной недо­ста­точ­но­стью. Обыч­но те­сти­ку­ляр­ная недо­ста­точ­ность встре­ча­ет­ся у муж­чин с син­дро­мом Кляйн­фель­те­ра и у муж­чин, под­верг­ших­ся вы­со­ко­доз­ной хи­мио­те­ра­пии или транс­план­та­ции ге­мо­по­э­ти­че­ских ство­ло­вых кле­ток. В на­сто­я­щее вре­мя этим па­ци­ен­там пред­ла­га­ет­ся дол­го­сроч­ная те­ра­пия те­сто­сте­ро­ном, ко­то­рая мо­жет вы­зы­вать бес­пло­дие. Мы оце­ни­ли под­ход для изо­ля­ции и диф­фе­рен­ци­а­ции ство­ло­вых кле­ток Лей­ди­га у муж­чин с бес­пло­ди­ем, под­верг­ших­ся биоп­сии яичка.

Методы

Все­го 6 муж­чин с те­сти­ку­ляр­ной недо­ста­точ­но­стью под­верг­лись биоп­сии яич­ка для по­лу­че­ния спер­ма­то­зо­и­дов. Ис­поль­зуя одоб­рен­ный ЛЭК про­то­кол, око­ло 10 мг тка­ни яич­ка от каж­до­го из этих муж­чин бы­ли об­ра­бо­та­ны для изо­ля­ции и куль­ти­ви­ро­ва­ния ство­ло­вых кле­ток Лей­ди­га. Ство­ло­вые клет­ки Лей­ди­га и клет­ки Сер­то­ли бы­ли про­ана­ли­зи­ро­ва­ны с ис­поль­зо­ва­ни­ем им­му­но­флу­о­рес­цен­ции (ИФ) и ко­ли­че­ствен­ной по­ли­ме­раз­ной цеп­ной ре­ак­ции в ре­аль­ном вре­ме­ни (кПЦР) на пред­мет PDGFR-a и Sox-9 со­от­вет­ствен­но. По­сле сти­му­ля­ции лю­те­и­ни­зи­ру­ю­щим гор­мо­ном (ЛГ), мы срав­ни­ли уров­ни 3ßHSD мРНК (участ­ву­ю­щей в син­те­зе те­сто­сте­ро­на) с по­мо­щью кПЦР и вы­ра­бот­ку те­сто­сте­ро­на в сре­де зре­лы­ми клет­ка­ми Лей­ди­га с по­мо­щью ра­дио­им­му­но­анализа.

Ре­зультаты

Мы успеш­но изо­ли­ро­ва­ли и куль­ти­ви­ро­ва­ли ство­ло­вые клет­ки Лей­ди­га у 6 муж­чин с те­сти­ку­ляр­ной недо­ста­точ­но­стью, под­верг­ших­ся биоп­сии яич­ка. Ство­ло­вые клет­ки Лей­ди­га вы­дер­жи­ва­лись в сре­де без ЛГ до 30 дней. Мы про­ве­ли как ми­ни­мум пять неза­ви­си­мых изо­ля­ций в те­че­ние 30 дней. Мы смог­ли куль­ти­ви­ро­вать до 3 мил­ли­о­нов кле­ток на биоп­тат за 14 дней. На 14 день из куль­ти­ви­ро­ван­ных кле­ток до 70% бы­ли пред­став­ле­ны ство­ло­вы­ми клет­ка­ми Лей­ди­га и 10% бы­ли клет­ка­ми Сер­то­ли по про­ис­хож­де­нию. Дан­ные ИФ и кПЦР по­ка­за­ли, что по­ка боль­шин­ство кле­ток в по­пуля­ции бы­ли недиф­фе­рен­ци­ро­ван­ны­ми, экс­прес­сия PDGFR-a бы­ла вы­со­кой. По­сле сти­му­ля­ции ЛГ ин­ду­ци­ро­ва­лась экс­прес­сия 3ßHSD, а экс­прес­сия PDGFR-a сни­жа­лась как на уровне РНК, так и на уровне белка.

Выводы

На­ши ре­зуль­та­ты де­мон­стри­ру­ют, что ство­ло­вые клет­ки Лей­ди­га мо­гут быть изо­ли­ро­ва­ны и куль­ти­ви­ро­ва­ны от муж­чин с те­сти­ку­ляр­ной недо­ста­точ­но­стью. Ство­ло­вые клет­ки Лей­ди­га мо­гут быть диф­фе­рен­ци­ро­ва­ны с по­мо­щью ЛГ, и зре­лые клет­ки Лей­ди­га мо­гут быть функ­цио­наль­ны­ми. Эти ре­зуль­та­ты пред­по­ла­га­ют, что те­ра­пия ство­ло­вы­ми клет­ка­ми Лей­ди­га мо­жет при­ме­нять­ся для по­вы­ше­ния сы­во­ро­точ­но­го уров­ня те­сто­сте­ро­на без вли­я­ния на фер­тиль­ность.

Авторы: HIMANSHU ARORA, Marilia Sanches Santos Rizzo Zutti, Bruno Nahar, Joshua M. Hare, Ranjith Ramasamy
MIAMI, FL
Журнал: Journal of Urology, April 2017, Volume 197, Issue 4, Supplement, Page e1090
DOI | Ссылка