Точность количественной оценки окисления ДНК сперматозоидов человека и определение порогового значения с использованием 8-OHdG иммунодетекторного анализа

Аннотация

Разработан метод количественного определения степени окисления ДНК сперматозоидов человека.

Вопрос исследования

Можно ли определить дискриминантный порог для показателя окисления ДНК сперматозоидов человека?

Краткий ответ

Был обнаружен дискриминантный порог, который был равен 65.8% сперматозоидов с положительной окраской на 8-гидрокси-2’-дезоксигуанозин (8-OHdG) и средней интенсивности флуоресценции (СИФ) в 552 относительных единицы.

Что уже известно

Известно, что оксидативный стресс ухудшает качество спермы и оплодотворяющую способность. Однако текущая практика не включает в себя рутинные методы определения оксидативного повреждения ДНК в сперматозоидах; отсутствуют оптимизированные консенсусные протоколы, и не установлен порог нормальности.

Дизайн, объем и продолжительность исследования

Внутри- и межметодные сравнения между 4 протоколами (I-IV) были проведены для определения наиболее релевантных и эффективных методов оценки содержания 8-оксо-dG в сперматозоидах человека. Тесты на воспроизводимость, специфичность, чувствительность и стабильность выполнялись для валидации оптимизированной методологии для рутинного использования в диагностике.

Участники/материалы, условия и методы

В этом проспективном исследовании сравнивались три иммунологических метода, а именно иммуноцитохимия, флуоресцентная микроскопия и проточная цитометрия. Окисление ДНК сперматозоидов у 80 пациентов определяли относительно параметров спермы и клинических состояний с использованием выбранного иммунологического протокола в сравнении с коммерческим набором. Эти пациенты (возраст 35 ± 1 лет: среднее ± SEM) имели нормозооспермию (n = 40) или изменённые параметры (некро- или / и астено- или / и тератозооспермия или / и лейкоцитоспермия).

Основные результаты и влияние случайности

Значительная положительная корреляция Пирсона и Спирмена была определена для значений 8-OHdG и параметров сперматозоидов с использованием протокола III. Значительная высокая и положительная корреляция была выявлена для СИФ с ИМТ и концентрацией лейкоцитов.

Протокол III был наиболее дискриминативным методом в отношении анализа воспроизводимости, специфичности, чувствительности, стабильности и надёжности при изменении параметров спермограммы, особенно в отношении лейкоцитоспермии, согласно параметрическим или непараметрическим тестам и определению размера воздействия и факториального анализа, такого как анализ главных компонентов и фактор-дискриминантного анализа.

Интересно, что у 39% пациентов с «патологическими» значениями окисления ДНК сперматозоидов отмечалась нормозооспермия.

Ограничения, причины для осторожности

Популяция с олигозооспермией не оценивалась в данном исследовании т. к. для проведения подобных сравнений было недостаточно материала. Однако в статистическом анализе учитывалась концентрация сперматозоидов.

Более широкие выводы из полученных результатов

Наше исследование является первой валидацией протокола для определения дискриминантного порога для окисления ДНК сперматозоидов человека. Были продемонстрированы точность выявления 8-OHdG-остатков в ДНК сперматозоидов человека, стабильность во времени и его связь с качеством сперматозоидов. Анализ должен найти применение в диагностике мужского фактора бесплодия, связанного с оксидативным стрессом.

Финансирование исследования / конфликт интересов

Эта работа финансировалась за счет институтских грантов от CNRS, INSERM и Université Clermont Auvergne (J. R. D.), а также исследовательских фондов Clinerm-CEROS Clermont-Ferrand (L. J. и F. B.). P. G., A. M., R. J. A. и J. D. являются, соответственно, генеральным директором, научным директором и научными консультантами американской биотехнологической компании (Celloxess, Принстон, Нью-Джерси, США), занимающейся профилактической медициной с акцентом на производство антиоксидантных пероральных добавок.

Авторы: S Vorilhon, F Brugnon, A Kocer, S Dollet, C Bourgne, M Berger, L Janny, B Pereira, R J Aitken , A Moazamian, P Gharagozloo, J Drevet, H Pons-Rejraji.
CHU Clermont Ferrand, CHU Estaing, Laboratoire de Biologie du Développement et de la Reproduction, AMP, CECOS, F-63003 Clermont-Ferrand, France; Université Clermont Auvergne, CNRS UMR6293, INSERM U1103, GReD, F-63000 Clermont-Ferrand, France
Журнал: Human Reproduction, Volume 33, Issue 4, 1 April 2018, Pages 553–562
DOI | Ссылка на источник