Быстрый, недорогой и эффективный метод диагностики фрагментации ДНК сперматозоидов у нескольких видов
Аннотация
На нескольких видах животных успешно опробован дешёвый и быстрый способ оценки фрагментации ДНК сперматозоидов.
Фрагментация ДНК сперматозоидов является состоянием, которое напрямую влияет на эффективность репродукции. В настоящее время существует несколько методов для оценки целостности ДНК сперматозоидов, например Alkaline Comet, TUNEL и Sperm Chromatin Structure Assay.
Однако, многие из этих методик являются трудоёмкими и требуют высокоточного оборудования. Поэтому разработка новых методик может оптимизировать оценку степени повреждения ДНК. Поэтому целью этого исследования была стандартизация методики с окрашиванием толуидином синим (ТС) для анализа фрагментации ДНК сперматозоидов кобелей, котов, быков, коней и баранов.
С этой целью мы использовали по шесть животных репродуктивного возраста каждого вида (n = 30). Сперматозоиды были получены разными методами, соответствующими особенностям каждого вида, и такие образцы были разделены в две аликвоты: один образец сперматозоидов хранился при температуре 5°C (рассматривался как образец с интактной ДНК сперматозоидов), а другие образцы подвергали индукции фрагментации ДНК, выставляя на ультрафиолетовое излучение на 4 часа.
Образцы затем смешивали с интактным, чтобы получить порции с известными прогрессивными пропорциями сперматозоидов с фрагментированной ДНК (0%, 25%, 50%, 75% и 100%). Выполнялись мазки семенной жидкости, которые подвергались окрашиванию ТС. Считалось, что окрашенные в синий цвет сперматозоиды подверглись фрагментации ДНК.
Мы наблюдали высокие коэффициенты линейной регрессии между ожидаемой долей повреждённой ДНК и результатами окраски ТС образцов сперматозоидов кобелей, котов, баранов, быков и коней. В заключение, окрашивание ТС можно считать быстрым и эффективным методом оценки ДНК сперматозоидов у нескольких видов.
Авторы: BR Rui, DSR Angrimani, LC Bicudo, JDA Losano, M Nichi, RJG Pereira
Department of Animal Reproduction, School of Veterinary Medicine and Animal Science, University of São Paulo, São Paulo, Brazil
Журнал: Reproduction in Domestic Animals, Volume 53, Issue 1, February 2018, Pages 171-175
DOI | Ссылка на источник