Цель:
Проанализовать общее метилирование ДНК и экспрессию метилтрансфераз ДНК (DNMT) на уровне транскрипции у пациентов с нарушением сперматогенеза с целью выяснения роли этой связи в патофизиологии мужского бесплодия.
Методы:
Содержание метилированного цитозина (мЦ) определяли с использованием системы твердофазного иммуноферментного анализа (набор для количественного определения Imprint Methylated DNA, Sigma-Aldrich) в 31 биоптате тканей яичка с признаками нарушения сперматогенеза и в 8 биоптатах с нормальным сперматогенезом. Для анализа уровня мРНК DNMT (DNMT1, DNMT3A, DNMT3B и DNMT3l) в биоптатах с разным фенотипом тканей яичка проводили полимеразно-цепную реакцию с обратной транскриптазой в реальном времени.
Результаты:
Отмечено значимое усиление общего метилирования в различных фенотипах с нарушением функции яичек по сравнению с нормой. Анализ экспрессии показал значимое увеличение экспрессии DNMT1 и положительную корреляцию ее уровня с общим метилированием ДНК.
Вывод:
Увеличение степени общего метилирования при нарушении сперматогенеза может быть одним из факторов, способствующим аномальной экспрессии генов у бесплодных пациентов.
МНЕНИЕ ЭКСПЕРТА
— Работа подтверждает важность оценки уровня метилирования ДНК — усиление степени общего метилирования приводит к нарушениям сперматогенеза. Интересно, как объясняли необходимость проведения биопсии яичек пациентом с нормальным сперматогенезом?Овчинников Р. И.